Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢扩展

从第一次注意到人体内自身HIV到注意到1HG心血管疾病病理症状的困难重重率在老年人时期就有良好的描述，多个人体内自身HIV中性的老年人当中有70%在肝脏转换后10年内患心血管疾病，而随访15年的老年人这一数目增加到84%。相对于之下，占病理1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的发病机制还没得到充分的险恶研究。

越来越多的人开始用到仍须系统来定义1HG心血管疾病的困难重重：母体在注意到多种人体内自身HIV时踏入第1阶段，注意到血糖精神状态时踏入第2阶段，注意到症状时踏入第3阶段。一些多发人体内自身HIV中性的母体，在1期和2期，困难重重较极快，并发展为发病的1HG心血管疾病。我们之后描述了除此以外在首次监测到多种人体内自身HIV比对后多于10年无心血管疾病的极极快困难重重者，这组高血压人数少，但基本特征非常明确。随后，我们发现人体内自身抗原特异性CD8+T肝细胞反应在困难重重缓极快的高血压当中基本上不依赖于，但在早先发病和长期依赖于的心血管疾病高血压当中很容易监测到。这可能表明，与困难重重高血压相对于，这些高血压自身免疫反应的缓冲增强。

早期险恶研究表明，尽管缓冲性T肝细胞(Treg)数量情况下，但心血管疾病高血压依赖于一些动态瑕疵，其当中除此以外对IL-2的反应战斗能力降低。此外，心血管疾病高血压当中的现像CD4+T肝细胞可能对缓冲不具抵抗性，表现为现像T肝细胞的诱发弱化，自然显现出的Treg和体外显现出的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞当中IL-2反应弱化。本险恶研究的最终目标是描述了CD4+缓冲性T肝细胞(Treg)在一小群极缓极快困难重重者当中的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX险恶研究是一项以人群为基础的纵向险恶研究，在21岁以下复发的高血压亲族当中检查1HG心血管疾病的危险因素。我们之后描述了长期缓极快困难重重者的基本特征，他们始终保持多重人体内自身HIV中性超过10年，但没注意到心血管疾病的病理症状，极快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名在此期间始终保持无心血管疾病并不愿提供大量血液循环比对的缓极快困难重重者归属于T和B肝细胞动态归纳。在目前的险恶研究当中，8名极快困难重重者(SP组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的人体内自身HIV中性。所有的参与者都西北面1HG心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身HIV对某些抗原的中性反应，然而，一名高血压已经西北面2期多于6年，但没注意到病理症状，一名高血压被病理为心血管疾病，该病患72岁，在采集测试比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该小分子同步进行了单独指标。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞奥义和T肝细胞诱发试验指标小分子当中Treg的频率、表HG和动态。用到FlowSOM和CITRUS(聚类险恶研究、表征和回归)同步进行无委派聚类归纳，指标Treg表HG。

结果：与健康小分子相对于，来自极快困难重重体的心灵CD4+T肝细胞的委派聚类推断，激来生的心灵CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素抑止的TNFR相关细胞(GITR)表达出来增加有关。一名HbA1c升高的高血压与困难重重缓极快者和匹配的相符合组相对于，Treg谱有所各有不同。动态归纳表明，与健康小分子相对于，来自缓极快困难重重体的Treg介导的CD4+现像T肝细胞诱发引人注意受损。表现为对现像CD4+T肝细胞CD25和CD134表达出来的诱发增加。

所示1 险恶的表HG归纳推断，CD4+Treg亚HG在极快困难重重队列当中增加。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有小分子的来生CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示出物表达出来险恶研究出10个元簇:心灵T肝细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T肝细胞;HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个各有不同Treg标示出作用于的10个元簇的MST。每个节点代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点组周围上色。每个节点当中的点心所示暗示单个标示出的表达出来级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整体标示出表达出来。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起同位素为每个metacluster装有本站所示(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T肝细胞(l)。橘色白点代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg频率的增加是困难重重缓极快的所示标。国际标准门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的各有不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表达出来同步进行分离，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)组以及小分子SP 606(橘色)当中CD25+ cd127的频率汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控孙有界的装有本站所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，箭头醒目的簇被识别系统为SP和HD队列彼此间的各有不同。(j)装有本站所示推断了在SP(白点)和HD(灰点)组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起同位素(数目)。(k)直方所示推断每个簇的表HG(紫色)和Treg标示出比起表达出来与背景表达出来(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇当中标示出的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

所示3 与健康献血者相对于，困难重重缓极快者心灵treg的GITR增加。每个心灵CD4+T肝细胞元簇(心灵T肝细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T肝细胞;HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出来标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热所示(sp606不除此以外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达出来串联，推断直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(橘色)所有小分子除此以外，p< 0.05(粉红色)小分子SP 606和匹配的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达出来，从国际标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)串联，推断直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

所示4 来自缓极快困难重重的CD4+ treg肝细胞管控现像CD4+T肝细胞的战斗能力降低。SP组用粉红色的本站和白点暗示，HD组用黑色的本站和白点暗示，橘色的本站/白点暗示小分子sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示出为CFSE, Treg按检视的数目滴定。用抗CD3 /28微珠激来生肝细胞，人才3天后同步进行流式肝细胞奥义监测。(a-d)与CD4+反之亦然者比起应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。用到中性相符合(激来生的响应肝细胞不含treg)计算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现像CD4+T肝细胞对缓极快困难重重的T肝细胞激来生的诱发更敏感。SP组用粉红色的本站和白点暗示，HD组用黑色的本站和白点暗示，橘色的本站/白点暗示小分子sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示出，treg按检视的数目滴定。用抗CD3 /28微珠激来生肝细胞，人才3天后同步进行流式肝细胞奥义(CD25反染)和肝细胞因孙子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同完成人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才当中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自缓极快困难重重孙子的激来生心灵CD4+Treg在GITR表达出来当中得到了扩展和丰富，强调了进一步险恶研究Treg在1HG心血管疾病可能会母体当中的表征的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28